안녕하세요.
Particle Metrix GmbH 사의 국내 단독 대리점, 위드인스트루먼트입니다.
이번에는 Zetaview를 활용하여 엑소좀(Exosome)을 포함한
세포 외 소포체(Extracelluar Vesicles [EVs])의 제타 전위 (Zeta Potential [ZP]) 분석한
결과에 대한 내용을 소개 드리고자 합니다.
ZP는 입자 (particle)의 표면 전위를 측정하는 것에 널리 사용되는 방법이며
일반적으로 입자가 띈 표면 전하의 지표로 사용되고 있습니다.
콜로이드의 분산 안정성 (Colloid Stability)은 표면 화학, 생물학적 결합,
적용된 이론적 모델에 영향을 받습니다.
ZP에 영향을 주는 요소들을 조사하였습니다.
EVs는 Choriocarcinoma(융모막암종) 유래 JAr 세포에서 추출하였고
다양한 Phosphate 이온 농도(0.01mM, 0.1mM, 1mM)로 설정된
Phosphate-Buffered Saline (PBS)으로 수집하고, 계면활성제 (Tween-20)의
포함 유무, 10mM의 몇 종류의 Salts(NaCI, KCI, CaCI₂, AICI₃) 및
다른 pH값 (4, 7, 10)으로 ZP를 측정했습니다.
세포 및 엑소좀(Exosome)의 생리학적 구조
30 ~ 200nm EVs 입자 크기 분포 분석 by Zetaview®
PBS의 농도, 입자의 농도에 따라 ZP를 측정한 결과 (pH 6.9)
10^6 EVs/ml (흰색), 10^7 EVs/ml (회색), 10^8 EVs/ml (진한 회색)
PBS 1mM에서 0.01mM과 확실한 차이를 확인하 수 있었습니다. (p<0.05)
Tween-20의 첨가 유무에 따라 ZP를 측정한 결과 (pH 6.9)
10mM NaCI, KCI, CaCI₂, AICI₃를 첨가한 ZP측정 및 이온의 세기 측정한 결과 (pH 6.9)
CaCI₂와 AICI₃이 이온 강도와 ZP값이 확실히 다른 것을 확인했습니다. (p<0.05)
pH의 변화에 따른 ZP의 측정한 결과 (108 Particles/ml)
0.01mM(검은색), 0.1mM(회색), 1mM(흰색)
PBS 1mM에서 0.01mM과 확실한 차이를 확인할 수 있었습니다. (p<0.05)
이 연구는 EVs의 직접적인 특성화를 위해 Zeta Potential을 적용하는 것을
목표로 진행했습니다.
Choriocarcinoma(융모막암종) 세포 유래 EVs에서 다가 이온의
고농도인 (CA2+, AI3+) 음이온 (phosphate)의 사용은
EVs의 모든 농도 (10^6/ml, 10^7/ml, 10^8ml)에서 ZP의 음수 값 수치를
감소시켰지만 ZP값에 대한 1가 이온의 영향은 크지 않았습니다. (K+, Na+, CI-)
연구에 사용한 EVs에 ZP는 용액의 pH에 따라 달라졌습니다.
계면활성제 (Tween-20)의 사용도 상당히 ZP의 음수 값을 감소시켰습니다.
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감사합니다.
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