NTA 분석법과 마이크로RNA칩 분석법

 

NTA & miRNA Microarrays

NTA 분석법과 마이크로RNA칩 분석법

 

[Zetaview 관련 논문]

HIV-Nef and ADAM17-Containing Plasma Extracellular Vesicles Induce and Correlate with Immune Pathogenesis in Chronic HIV Infection

HIV-Nef 및 ADAM17 함유 혈장(Plasma) 세포 외 소포(EVs)와 만성 HIV 감염에 대한 면역적 발병과의 연관성

 

Jung-Hyun Lee a, Stephan Schierer a, Katja Blume a, Jochen Dindorf a, SebastianWittki a,Wei Xiang b,

Christian Ostalecki a, Nina Koliha c, Stefan Wild c, Gerold Schuler a, Oliver T. Fackler d, Kalle Saksela e,

Thomas Harrer f, Andreas S. Baur a,⁎

a Department of Dermatology, University Hospital Erlangen, Friedrich-Alexander-University of Erlangen-Nürnberg, Translational Research Center, Ulmenweg 12, 91054 Erlangen, Germany

b Department for Biochemistry and Molecular Medicine, Friedrich-Alexander University of Erlangen-Nürnberg, Fahrstraße 17, 91054 Erlangen, Germany

c Miltenyi Biotec GmbH, Friedrich-Ebert-Straße 68, 51429 Bergisch Gladbach, Germany

d Department of Infectious Diseases, Integrative Virology, University Hospital Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 324, 69120 Heidelberg, Germany

e Department of Virology, 00014 University of Helsinki, PO Box 21, Haartmaninkatu 3, Finland

f Department for Internal Medicine 3, University Hospital Erlangen, Friedrich-Alexander-University of Erlangen-Nürnberg, Ulmenweg 18, 91054 Erlangen, Germany

 

[출처] https://www.thelancet.com/journals/ebiom/article/PIIS2352-3964(16)30087-1/fulltext

 

초록

항레트로바이러스 치료(Antiretroviral therapy, ART)는 HIV 복제를 효율적으로 억제하지만 면역 활성화와 CD4 T 세포의 수가 적은 현상이 지속되는 경우가 많습니다.

이 ART 내성 병인의 근본적인 메커니즘은 명확하지 않습니다.

우리는 혈장 세포 외 소포(pEV)의 수치가 HIV 감염에서 강하게 증가하고 ART 중에는 감소하지 않는 것을 관찰했습니다.

놀랍게도, 이러한 소포들에는 효율적인 ART 하에서 발현되지 않는 것으로 추정되는 바이러스성 부속 단백질인 Nef 및 Vpu는 물론 활성화된 ADAM17을 포함한 염증 유발 반응기도 포함되어 있었습니다.

HIV pEV는 활성화된 αvβ3의 존재와 CD81 및 Tsg101의 결핍으로 특징지어졌습니다.

면역 활성화와 관련하여 말초 단핵구(Monocyte)들은 다량의 pEV를 섭취하여 염증성 사이토카인(Cytokine)을 분비하는 CD1c +, CD14+ 세포의 개체수를 증가시켰습니다.

중요한 것은 염증 유발 성분, 특히 ADAM17 활성이 낮은 T 세포 수와 관련이 있다는 것입니다.

예비 증거에 따르면, HIV pEV는 말초 단핵 세포와 알려지지 않은 골수 세포 집단에서 유래했습니다.

요약하자면, 우리는 지속적인 바이러스성 Nef 활성으로 인해 만성 HIV 감염에서 염증 유발성 pEV의 중요한 역할을 시사합니다.

 

실험 내용

 

그림 1. 바이러스 성 및 비 바이러스 성 HIV 감염에서 높은 수준의 Nef 함유 pEV

 

(a) miRNA micro array

바이러스성 HIV 환자 및 건강한 대조군 (왼쪽 패널) 및 비 바이러스성 환자 (오른쪽 패널)에서 파생 된 miRNA Micro array로 얻은 pEV miRNA 수준의 비교

각 점은 빨간색 점과 화살표로 예시 된 miRNA 하나의 신호 강도를 나타냄

pEV는 혼합 혈장(Pooled plasma) 24ml (개체 4 명, 각 6ml)에서 Sucrose gradient로 추출

AFI : Average fold-increase of all miRNAs over reference

RLU : Relative Light Units

(b) miRNA micro array

8 명의 건강한 사람과 2명의 바이러스성 개체(2.1 x 104 및 5.6 x 103 바이러스 표본 / ml) 및 2 명의 비바이러스성 HIV에 감염된 개체의 pEV (14ml 혈장)에서 추출된 miRNA의 기하학적 거리를 기반으로 한 계층적 군집화(Clustering)

(c) Protein levels(ug) in Sucrose gradient fraction 1.13–1.23 (그림 1D)

(103–105 바이러스 표본 수 / ml) 및 비 바이러스 개체 (20개 이하 바이러스 표본 / ml) 및 대조군 (n=4)

(d–e) Sucrose gradient 및 NTA 결과 [pEV의 입자 수 및 크기 분석]

(d) 바이러스가 아닌 개인 풀의 pEV 분석 예시입니다

Zetaview® 나노입자추적(NTA)분석기를 사용하여 건강한 대조군 (n = 4, 각각 24ml의 풀) 분석

(e) 독일 ParticleMetrix사의 ZetaView® NTA분석기를 사용하여 7 명의 비 바이러스 개체와 6 명의 건강한 대조군의 15ml 혈장에서 추출한 그라데이션 정제 pEV

측정 값을 바탕으로 혈장 ml 당 pEV 농도를 표시

[Particle Metrix GmbH 사의 Twin Zetaview(PMX-220)과 Mono Zetaview(PMX-120)]